QIAGEN凱杰Ni-NTA Agarose幾大特點
利用重力流層析純化His-tagged蛋白
- 一步純化就可從細胞裂解液中得到純度大于95%的蛋白
- 高親和力和高結合能力
- 可以選擇在天然或變性條件下純化蛋白
- 預先加載的即用型基質適合任何規(guī)模的蛋白純化
- 提供自動純化和檢測的方法
Ni-NTA Agarose是親合層析用基質，用于純化帶有His標簽的重組蛋白。His標簽上的*殘基能高特異性的結合到固定的鎳離子上。細胞裂解上清液上樣到純化基質上，His-tagged蛋白結合，其他蛋白則流過基質。洗滌后，His-tagged蛋白可在天然或變性條件下洗脫。
QIAGEN凱杰Ni-NTA Agarose幾大特點
在天然條件下一步純化蛋白。
在天然條件下純化蛋白。人血清應答因子（SRF）在帶有牛痘病毒載體的HeLa細胞中表達，使用Ni-NTA Agarose以及在洗滌和洗脫步驟中不同濃度的咪唑純化。銀染法使得蛋白可見。CL：細胞裂解物；FT：流過部分；W1: 0.8 mM洗滌液；W2 & W3: 8 mM 洗滌液；W4 & W5: 40 mM 洗滌液；E1 & E2: 80 mM 洗脫液。（數據由德國H. Stunnenberg, EMBL, Heidelberg提供。）
Performance
Ni-NTA Agarose中的Ni-NTA與Sepharose CL-6B support偶聯(lián)，具有強結合能力，非特異性結合少（參見"One-step purification under native conditions"）。這種材料對于多數的生產規(guī)模和柱純化具有的可操作性。Ni-NTA Agarose可單獨訂購，也包含在QIAexpress Kits中。QIAexpress Kits是適用于大腸桿菌His-tagged蛋白高效表達和純化的完整試劑盒。
Principle
QIAexpress Ni-NTA Protein Purification System基于獲得的Ni-NTA（氨基三乙酸鎳）樹脂，對含有6個或以上*殘基（連續(xù)或交替）親合標簽的蛋白選擇能力強。該技術可在天然或變性條件下，從所有表達體系中一步純化幾乎所有的His-tagged蛋白。NTA含有四個鎳離子螯合位點，與鎳的結合能力比其他僅有三個金屬螯合位點的金屬螯合純化方法的結合能力強。多出的一個螯合位點可防止鎳離子脫落，因此具有更強的結合能力，蛋白純度比金屬螯合純化方法的蛋白純度高。QIAexpress技術可用于從桿狀病毒、哺乳動物細胞、酵母和細菌等各種表達體系中純化His-tagged蛋白。
Procedure
His-tagged蛋白的純化包括四個步驟：裂解、結合、洗滌和洗脫（參見Protein purification with the Ni-NTA protein purification system）。使用QIAexpress 技術純化重組蛋白無需依賴于蛋白的三維結構或6xHis標簽。因此可實現在天然或變性條件下，從稀釋溶液或細胞裂解液中一步純化蛋白?？墒褂脧娮冃詣┖拖礈靹└咝芙夂图兓荏w、膜蛋白和形成包涵體的蛋白。洗滌緩沖液中可包含有能高效去除非特異性結合產物的試劑（見表）。在溫和條件下加入100–250 mM咪唑作為競爭性洗脫試劑或降低pH值，可洗脫得到純化蛋白。
