分子量排阻層析（SEC）又稱凝膠過濾層析，它根據(jù)分子量大小來分離分子。凝膠基質由特定大小孔隙的球形 小珠組成，不同分子量的分子從孔中排阻通過，發(fā)生分離。小分子進入孔內(nèi)，會延滯它們通過層析柱，而大分子避 開孔，洗脫入層析柱外水體積。因此，樣品根據(jù)分子量大小進行分離，并依照分子量遞減順序洗脫。
依據(jù)層析目的和所需的分辨率來選擇操作條件和介質。分子量排阻層析中一種常規(guī)的方法為基團分離，包括：
脫鹽— 目標分子洗脫出來，而小分子保留在凝膠孔內(nèi)。為了獲得理想的分離，基質的分子量排阻限度應比目 標分子小。
分級分離— 一定分子量范圍的分子在凝膠基質內(nèi)分離。使用這種方法時，目標分子應當在凝膠的分級分離范 圍以內(nèi)。
分子量排阻層析常規(guī)應用包括蛋白分級分離及分子量確定、核酸分離、質粒純化和多糖分級分離。
層析分辨率取決于顆粒大小、孔徑大小、流速、層析柱尺寸和樣品體積。通常，低流速（2–10 cm/hr）、細長 柱、小顆粒凝膠、小樣品體積（總床體積的1–5%）、2 倍的分子量差異以及相同的溶液粘度，可以獲得zui高分辨率。 如果用于脫鹽，樣品體積則可達到總床體積的30–40%，并可使用短粗柱。
關于抗體純化應用指南，請索取資料# 1802。蛋白應用指南請索取資料# 1801。
瓶裝分子量排阻層析介質
Bio–Gel P 聚丙烯酰胺微球體由丙烯酰胺和N,N"– 甲叉雙丙烯 酰胺共聚而成，用于高分辨率的凝膠過濾。Bio–Gel P 凝膠具有以 下特點：
- 可分離不同大小的分子，分子量范圍從100至100,000
- 本質上雖是非離子，但極度親水
- 為敏感化合物提供有效而溫和的凝膠過濾
- 特殊的合成組份，不象右旋糖苷和瓊脂糖易滋生微生物或過濾碳水化合物
- 在室溫、pH 2–10條件下操作，可高壓滅菌（pH 5.5–6.5）。流速和分辨率隨著溫度的遞增（4–80°C）而增加
Bio–Gel P凝膠可與弱有機酸、8M尿素、離液劑、去垢劑和易混有機溶劑兼容。酒精（zui高20% v/v）可以提高 核苷酸、多肽和丹寧酸的溶解度，而不改變凝膠的排阻特性。同樣可以使用甲酰胺溶劑，Bio–Gel P凝膠可在該溶劑 內(nèi)*溶脹。
Bio–Gel P–6DG凝膠的zui大分子量排阻為6,000，是專為脫鹽和緩沖液置換而設計。它可迅速獲得結果，且回收 率高、樣品稀釋度小。凝膠的疏水性確保與樣品分子間幾乎不發(fā)生交互作用。
更多信息，請索取資料# 2068。
Bio–Beads S–X 介質是中性、多孔的聚苯乙烯二乙烯基苯微球體，用于親脂性多聚物和有機洗脫溶質的分子量 排阻層析。分子量400–14,000 的排阻范圍，可用于分離分子量小的有機多聚物和其它疏水物質，如殺蟲劑、滅鼠 劑、多環(huán)芳香化合物和不飽和脂類。使用不同的洗脫劑會影響排阻極限。用Bio–Beads S–X 介質分離需要可流動的 洗脫劑，因此，該介質必須在層析柱內(nèi)使用。洗脫溶劑的芳香性越強，排阻極限越高。介質可與苯、甲苯、二甲苯、 四氯化碳、二甲基甲酰胺、酮、芳香族類、二氯甲烷、o–二氯（代）苯、全氯乙烯、四氫呋喃和三氯（代） 苯等試劑兼容。
與交聯(lián)度相關的推薦流速：
- 1% 交聯(lián)度樹脂僅用于重力流層析
- 3% 交聯(lián)度樹脂可承受背壓20 bar 或300 psi，5 ml/in 的流速
- 8% 和12% 交聯(lián)度樹脂可承受多達33 bar 或500 psi 的背壓
預裝分子量排阻層析柱
為方便用戶，我們提供填裝Bio–Gel P–6 介質的預裝Econo–Pac 濾柱（1 ml 和5 ml）。由于Econo–Pac 濾柱無 需制備凝膠或裝柱，簡化了層析過程。濾柱可與BioLogic 系統(tǒng)、蠕動泵或任何層析系統(tǒng)配合使用，并可與注射器 連接進行簡單洗脫。
同時提供填裝有其它介質的Econo–Pac 濾柱；離子交換濾柱，羥基磷灰石濾柱，親和濾柱， 疏水作用濾柱。
| 名稱 | 載體 | 樣品體積 |
| 脫鹽，緩沖液置換 | ||
| P–6 | Bio–Gel P–6 | 100 μl–3.0 ml |
Bio–Sil 和Bio–Silect 層析柱是以硅材料為基質，用 于樣品成分分離、脫鹽或緩沖液置換和分子量或分子 常數(shù)估算。
硅材料的分子量排阻層析柱應用于分離pH 2–8 的多肽、蛋 白和核酸。分析柱有不銹鋼（Bio–Sil）和生物兼容的PEEK塑料（Bio– Silect）兩種。Bio–Sil 和Bio–Silect SEC 柱填裝了5μm 親水結合相硅，蛋白 載量0.01–1.5 mg。為了分離洗脫峰較接近的蛋白，獲得更高的分辨率，可 串聯(lián)使用2 個300 mm SEC 柱、工作壓>1000 psi 的系列層析系統(tǒng)。
該層析柱確保在70°C 下的熱穩(wěn)定性以及化學穩(wěn)定性。介質在甲醇、 乙醇、氰化甲烷、DMSO 和THF 等有機溶劑中穩(wěn)定。
