農(nóng)藥殘留檢測方法與步驟

檢測方法：酶抑制法

依據(jù)標準：國標GB/T 5009.199-2003

檢測儀器：RS-PR-24農(nóng)藥殘留快速檢測儀

  試劑配置

準備：純凈水/蒸餾水（不能用礦泉水/山泉水）、緩沖液。

顯色劑：加11毫升緩沖液，粉末溶解、混勻即可。

底物：加11毫升純凈水，粉末溶解、混勻即可。

酶：不用另配，可直接使用。

  樣品前處理

1.所有備檢樣品在檢測前無需進行水洗，否則影響數(shù)據(jù)準確度。

2.葉菜類：至少取不同株上的5片葉片疊加，剪成1cm見方秤取2g，加10ml提取液。

3.顏色深葉菜類：對一些葉綠素較高的蔬菜，也可采取整株蔬菜浸提方法，減少色素干擾。

4.非菜葉類：取果實的表皮，至少4克。用刀從上而下沿表面，削取一片，為增加檢測代表性，從不同的3個果實上削取一片，剪成1cm²大小，稱取4g。

5.豆類：用刀切片，其中毛豆去殼后檢測，在浸泡中會有部分白色外皮浸出，檢測液需進過濾。

6.水果類：如葡萄、提子、楊梅，整顆提取，取1顆，加提取液10ml，震蕩提取5分鐘，中間將樣品用玻璃棒轉(zhuǎn)位置，使樣品各表面充分接觸提取液。提取后取2.5ml上清液，再按正常步驟檢測。

 特殊樣品前處理

部分樣品，如蔥，蒜，蘿卜，韭菜，芹菜，香菜，以及番茄汁液中含有對酶有影響的植物次生物質(zhì)，容易產(chǎn)生假陽性，處理這類樣品的時候，可采取整株處理蔬菜浸泡或淋洗。

 操作步驟

 結(jié)果判定

1.△Ac值一定要＞0.3，否則計算出來的樣品抑制率是錯誤的，這種情況請重做實驗。

（Ac值＜0.3的原因：1、操作問題，加樣量不準確 2、酶溫度太低，或酶失去活性）

2.根據(jù)國家標準GB/T5009.199-2003要求，當(dāng)蔬菜樣品提取液對酶的抑制率≥50%時，表示蔬菜中有高劑量有機磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥存在，樣品為陽性結(jié)果。陽性結(jié)果的樣品需要重復(fù)檢驗2次以上，確保不是操作問題而導(dǎo)致的假陽性。如有必要，可用氣相色譜等方法作進一步確認。

3.陽性樣品復(fù)檢，在添加樣品名稱時，需把樣品編號改成初檢編號，初檢編號可在“查詢”中查看。 

4.如需打印數(shù)據(jù)，請在農(nóng)殘儀頁面未清空時打印。頁面清空后無法打印之前的數(shù)據(jù)?？稍?ldquo;查詢”，看數(shù)據(jù)是否已上傳。

5.如果需要重新做實驗：清空->關(guān)上蓋子->不放入比色皿，按“通道初始化”

如果需要添加菜名：設(shè)置->樣品名稱->添加

如果需要修改服務(wù)器：設(shè)置->數(shù)據(jù)中心->更改->確定

  檢測結(jié)果處理

1.陰性結(jié)果：結(jié)果為陰性時，可直接上傳至系統(tǒng)；

2.陽性結(jié)果：結(jié)果為陽性時，檢測樣品復(fù)檢多一次，如復(fù)檢結(jié)果為陰性，則可直接上傳數(shù)據(jù)；如復(fù)檢結(jié)果還是為陽性時，則數(shù)據(jù)上傳后，檢測樣品做退換貨處理，并做好退換貨記錄備查。

  注意事項

1.平時試劑需要放在2~8℃保存，緩沖液可直接放在室溫保存，配制好的試劑在使用前，要先恢復(fù)到室溫，否則會影響結(jié)果的準確性，試劑使用前請搖勻。

2.比色皿為易碎材質(zhì)，需要小心保管，同時實驗過程中，請勿碰觸比色皿的光滑面，以免影響結(jié)果的準確性。

3.試劑避免交叉污染，取出后的試劑不可再打回瓶內(nèi)。

4.酶配制后經(jīng)常用10天內(nèi)用不完的，建議分裝為兩瓶保存，以避免酶因反復(fù)解凍而降低其活性。

5.每加一次試劑，移液器的槍頭都必須更換，避免試劑污染。

6.處理色素含量較高的果蔬樣品，應(yīng)采取整株（體）浸提，盡量避免過多色素浸出，干擾測定。若實驗室有條件，對色素干擾嚴重的過濾液,可用活性碳脫色處理.過濾或離心后，取清液作為待測液。

7.蔥、蒜、蘿卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇及番茄汁液中，含有對酶有影響的植物次生物質(zhì)，容易產(chǎn)生假陽性。處理這類樣品時，可采取整株浸提，避免次生物質(zhì)干擾。

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