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生產(chǎn)菌種的六種常規(guī)保藏方法

菌種保藏主要是根據(jù)菌種的生理生化特點，人工創(chuàng)造條件，使孢子或菌體的生長代謝活動盡量降低，以減少其變異。般可通過保持培養(yǎng)基營養(yǎng)成分在低水平、缺氧狀態(tài)、干燥和低溫，使菌種處于“休眠"狀態(tài)，抑制其繁殖能力。人們在長期的實踐中，對微生物種子的保藏建立了許多方法，般有下面幾種：

1.定期移植保藏法

將菌種接種于適宜的斜面或液體培養(yǎng)基，待其生長成健壯的菌體后，將菌種放置4℃冰箱保藏，每間隔定時間需重新移植。定期移植保藏法是早使用而且至今仍然普遍采用的方法。該法簡單易行，但是保藏的時間較短，菌種容易衰退。斜面保藏是種短期的、過渡的保藏方法，般保存期為3~6個月。

2.液體石蠟保藏法

在生長良好的斜面表面覆蓋層無菌液體石蠟，液面高出培養(yǎng)基1cm左右，然后保存在冰箱中。液體石蠟可以防止水分蒸發(fā)，隔絕氧氣，所以能延長保藏的時間。此法適用于不能利用石蠟油作碳源的細(xì)菌、霉菌、酵母等微生物的保存，保存期約年左右。

3.沙土管保藏法

這是內(nèi)常采用的種方法。它的制備方法是，取河沙過24目篩，用10%~20%的鹽酸浸泡除去有機質(zhì)，洗滌，烘干，分裝入安額管，加塞滅菌。需要保藏的菌株先斜面培養(yǎng)，再用無菌水制成細(xì)胞或孢子懸液，將10滴懸液注入裝有洗凈、滅菌河沙的沙管內(nèi)，使細(xì)胞或孢子吸附在沙上，放到干燥器中吸干沙中的水分，將干燥后的沙管用火焰熔封管口，可以室溫或低溫保藏。其特點是干燥，低溫，隔氧，無營養(yǎng)物。此法保藏的效果較好，制作也簡單，比液體石蠟法保藏時間長，適合于產(chǎn)泡子或芽孢的微生物，保藏時間可達數(shù)年，甚至數(shù)十年。

4.冷凍干燥保藏法

真空冷凍干燥保藏法是目前常用的較理想的種方法。該方法保藏效果好，對各種微生物都適用，內(nèi)外都已較普遍地應(yīng)用。該法是將菌液在凍結(jié)狀態(tài)下升華其中水分，后獲得干燥的菌體樣品。這種方法的基本操作過程是先將微生物制成懸浮液，再與保護劑混合，然后放在特制的安部管內(nèi)，用低溫酒精或干冰使其迅速凍結(jié)，在低溫下用真空泵抽干，后將安部管真空熔封，并低溫保藏。保護劑般采用脫脂牛奶或血清等。該法同時具備干燥、低溫和缺氧的菌種保藏條件，使微生物的生長和代謝都暫時停止，不易發(fā)生變異，所以，可使微生物菌種得到較長時間的保存，般可以保存5年左右。這種保藏方法需要定的設(shè)備，技術(shù)要求比較嚴(yán)格。

5.液氨超低溫保藏法

液氮超低溫保藏技術(shù)已被*為當(dāng)前有效的菌種長期保技術(shù)中的員，在外已普遍采用。它也是適用范圍廣的微生物保藏法，尤其是些不產(chǎn)泡子的菌絲體，用其他保藏方法不理想，可用此法保藏。液氮保藏的另大優(yōu)點是可利用各種培養(yǎng)形式的微生物進行保藏，不論孢子或菌體、液體培養(yǎng)物或固體培養(yǎng)物均可使用該法。液氮的溫度可達-196℃，遠遠低于菌種新陳代謝作用停止的溫度（-130℃），所以用液氮能長期保存菌種。

由于液氮保存于超低溫狀態(tài)，所使用的安額管需能承受大的溫差而不至于破裂，般用95料或GC17的玻璃管。因為菌種要經(jīng)受超低溫的冷凍過程，常用10%（體積分?jǐn)?shù)）甘油為保護劑。液氮法的關(guān)鍵是先把微生物從常溫過渡到低溫。因此，在細(xì)胞接觸低溫前，應(yīng)使細(xì)胞內(nèi)自由水通過膜滲出而不使其遇冷形成冰晶而傷害細(xì)胞。當(dāng)要使用或檢查所保存的菌種時，可將安額管從冰箱中取出，室溫或35~40℃

水浴中迅速解凍，當(dāng)升溫至0℃時即可打開安額管，將菌種移到適宜的培養(yǎng)基斜面上培養(yǎng)。

6.甘油保藏法

甘油保藏法與液氮超低溫保藏法類似。菌種懸浮在10%甘油蒸餾水，置低溫（-80~-70℃）保藏。該法較簡便，保藏期較長，但需要有超低溫冰箱。實際工作中，常將待保藏微生物菌培養(yǎng)至對數(shù)期的培養(yǎng)液直接加到已滅過菌的甘油中，并使甘油的終濃度在10%~30%

左右，再分裝于小離心管中，置低溫保藏?；蚬こ叹２捎迷摲ū２?。

內(nèi)外菌種保藏機構(gòu)

菌種保藏機構(gòu)的任務(wù)是在廣泛收集、生產(chǎn)和科研菌種、菌株的基礎(chǔ)上，把它們妥善保藏，使之達到不死、不衰、不亂和便于交換使用的目的。際上很多都設(shè)立了菌種保藏機構(gòu)。

微生物菌種保藏管理委員會成立于1979年，它的任務(wù)是促進我微生物菌種保藏的合作、協(xié)調(diào)與發(fā)展，以便更好地利用微生物資源，為我的經(jīng)濟建設(shè)、科學(xué)研究和教育事業(yè)服務(wù)。