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ELISA試驗(yàn)結(jié)果問題原因分析及解決辦法
ELISA試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在臨床上得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的檢測(cè)效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果?,F(xiàn)將操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給同行帶來一些啟發(fā),提高試驗(yàn)質(zhì)量。
操作步驟 | 可能原因 | 解決辦法 |
選 擇 試 劑 | 選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑,嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。 | |
加 樣 | 1.血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣; | 1.標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時(shí)后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次,放置一段時(shí)間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測(cè),可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。 |
孵 育 | 1.孵育時(shí)未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*; | 1.貼封片或加蓋; |
洗 板 | 1.采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。 | 1.保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干; |
顯 色 | 1. 顯色劑配制后放置時(shí)間過長(zhǎng)或使用過期顯色劑; | 1. 顯色劑盡量在臨用前配制,堅(jiān)持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; |
終 止 | 加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽(yáng)性增加。 | 加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。 |
全 過 程 | 1.整個(gè)操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; |
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