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微生物發(fā)酵的一般方式有哪些?
微生物發(fā)酵方式一般分為分批發(fā)酵、連續(xù)發(fā)酵和補(bǔ)料分批發(fā)酵。
圖1 保興賽斯離位滅菌玻璃發(fā)酵罐
一、分批發(fā)酵
分批發(fā)酵是將發(fā)酵培養(yǎng)基一次性投入發(fā)酵罐中,經(jīng)滅菌、接種和發(fā)酵,再一次性地將發(fā)酵液放出的一種發(fā)酵操作。分批發(fā)酵過(guò)程中,除不斷通氣和加入酸堿溶液以維持發(fā)酵環(huán)境外,與外界沒有物料交換,減少了污染機(jī)會(huì)。其主要特征是所有工藝變量都隨發(fā)酵時(shí)間的變化而變化。
分批發(fā)酵過(guò)程中的代謝變化一般可分為菌體生長(zhǎng),產(chǎn)物合成和菌體自溶3個(gè)階段:
(1)菌體生長(zhǎng)階段
菌體生長(zhǎng)階段處于發(fā)酵前期,這一階段主要是菌體適應(yīng)新環(huán)境,開始生長(zhǎng)繁殖,增加細(xì)胞數(shù)量,直至達(dá)到菌體臨界濃度。為減少種子液轉(zhuǎn)入發(fā)酵培養(yǎng)基后,對(duì)新環(huán)境的適應(yīng)時(shí)間,種子培養(yǎng)基的主要成分應(yīng)盡可能與發(fā)酵培養(yǎng)基的成分一致。
此階段的代謝變化,主要是培養(yǎng)基中碳源、氮源等的分解代謝和細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)的合成代謝,即營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)不斷被消耗,新菌體不斷合成,溶解氧水平不斷下降。當(dāng)其中某一因素成為限制因素時(shí),菌體生長(zhǎng)速度會(huì)減慢至一臨界值,菌體由生長(zhǎng)階段轉(zhuǎn)入產(chǎn)物合成階段。
(2)產(chǎn)物合成階段
產(chǎn)物生成階段處于發(fā)酵中期,此時(shí)菌體量增加趨于穩(wěn)定,代謝以合成產(chǎn)物為主,產(chǎn)物生成速率大。發(fā)酵液pH、溫度和溶氧等參數(shù)都會(huì)影響發(fā)酵過(guò)程中的代謝變化,增加副產(chǎn)物的生成,影響產(chǎn)量。保興賽斯的生物反應(yīng)系統(tǒng)可對(duì)一系列參數(shù)進(jìn)行檢測(cè)并反饋,以了解菌體生長(zhǎng)狀態(tài),調(diào)整發(fā)酵環(huán)境。
圖2 保興賽斯控制系統(tǒng)
(3)菌體自溶階段
菌體自溶階段處于發(fā)酵后期,此階段的代謝特征主要表現(xiàn)為菌體開始衰老、自溶,產(chǎn)物合成能力衰退,氨基氮含量增加,pH逐漸回升。此時(shí)發(fā)酵必須結(jié)束,否則不僅可能會(huì)使產(chǎn)物受到破壞,還會(huì)加大發(fā)酵后處理的困難。保興賽斯生物反應(yīng)器在配置相應(yīng)硬件后,其高級(jí)監(jiān)控軟件可根據(jù)氨基氮、菌濃、發(fā)酵單位等檢測(cè)數(shù)據(jù),生成相應(yīng)代謝曲線。對(duì)代謝曲線進(jìn)行研究分析,能掌握代謝變化的規(guī)律,發(fā)現(xiàn)工藝操作中存在的問(wèn)題,有助于改進(jìn)工藝,提高產(chǎn)量。
二、連續(xù)發(fā)酵
連續(xù)發(fā)酵是當(dāng)微生物培養(yǎng)到對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期時(shí),一方面以一定速度連續(xù)不斷地向發(fā)酵罐中流加新鮮液體培養(yǎng)基,另一方面又以同樣的速度連續(xù)不斷地將發(fā)酵液排出。連續(xù)發(fā)酵不僅減少了生物反應(yīng)器清洗、滅菌的時(shí)間,還因罐內(nèi)細(xì)胞濃度、pH值、營(yíng)養(yǎng)成分的濃度、溶解氧等都保持一定,發(fā)酵罐中的微生物生長(zhǎng)和代謝活動(dòng)始終保持旺盛狀態(tài),這大大提高了微生物發(fā)酵效率和設(shè)備利用率。
但連續(xù)發(fā)酵的實(shí)際運(yùn)行時(shí)間通常較長(zhǎng),選擇設(shè)備時(shí)應(yīng)特別注意設(shè)備的密封性能,及通入氣液的無(wú)菌度。并且,長(zhǎng)時(shí)間發(fā)酵會(huì)增加菌種變異的風(fēng)險(xiǎn),導(dǎo)致純種發(fā)酵難以長(zhǎng)期進(jìn)行。其次,由于發(fā)酵液體的連續(xù)性,發(fā)酵產(chǎn)物無(wú)法整齊地分成不同批次進(jìn)行追溯。
圖3 保興賽斯發(fā)酵罐
三、補(bǔ)料分批發(fā)酵
補(bǔ)料分批發(fā)酵是一種介于分批發(fā)酵和連續(xù)發(fā)酵之間的發(fā)酵方式,是指在發(fā)酵過(guò)程中,間歇或連續(xù)地補(bǔ)加新鮮培養(yǎng)基,使發(fā)酵系統(tǒng)維持低基質(zhì)濃度。補(bǔ)料分批發(fā)酵只向發(fā)酵罐中緩慢補(bǔ)加物料,不會(huì)連續(xù)向外放出發(fā)酵液,這既滿足了微生物生長(zhǎng)和產(chǎn)物持續(xù)合成的需要,又可以解除底物抑制,提高目的產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化率。尤其在產(chǎn)物合成階段,營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的濃度需控制在一定范圍內(nèi),以利于產(chǎn)物的合成。若營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)過(guò)多,則促進(jìn)菌體生長(zhǎng),抑制產(chǎn)物合成;若營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)過(guò)少,則菌體易衰老,產(chǎn)物合成能力衰退,不利于生產(chǎn)。
此外,當(dāng)代謝產(chǎn)物生成率或細(xì)胞生長(zhǎng)速率明顯受到某種底物組分濃度影響時(shí),采用補(bǔ)料分批發(fā)酵方式比分批發(fā)酵有利,比如以下情況:(1)高密度培養(yǎng)系統(tǒng);(2)存在Crabtree效應(yīng)的系統(tǒng);(3)受分解代謝物阻遏抑制作用的系統(tǒng);(4)利用營(yíng)養(yǎng)突變體的系統(tǒng)。
圖4 保興賽斯玻璃生物反應(yīng)器BIOTECH-JG系列
保興賽斯補(bǔ)料控制可采用數(shù)字化定時(shí)定量分段設(shè)置控制;蠕動(dòng)泵補(bǔ)料自動(dòng)控制;控制器可設(shè)定補(bǔ)料泵的開關(guān)周期。此外,補(bǔ)料可與pH 和溶氧關(guān)聯(lián)控制。
參考資料:吳松剛.微生物工程[M].北京:科學(xué)出版社,2004.
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