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大腸埃希氏菌和耐熱大腸菌群測試片

1.適用范圍：適用于各種水樣中大腸埃希氏菌和耐熱大腸菌群的快速檢驗

2.方法原理：耐熱大腸菌群（thermotoletant coliform  bacteria）是總大腸菌群的一部分．將培養(yǎng)溫度提高到44～45℃，在此條件下仍能生長和發(fā)酵乳糖的菌群被稱為耐熱大腸菌群。它們由埃希氏菌屬以及克雷伯菌屬、腸桿菌屬和檸檬酸桿菌屬中的一些菌種組成。其中大腸埃希氏菌（E.coli） 是zui準(zhǔn)確和專一的糞便污染指示菌。與總大腸菌群相比，耐熱大腸菌群在水體中的檢出，說明水體更為不清潔，存在腸道致病菌和食物中毒菌的可能性更大。大腸埃希氏菌耐熱大腸菌群測試片運用酶底物技術(shù)，含有大腸埃希氏菌*葡萄糖醛酸酶（glucuronidase）的顯色底物（XGLUC/blue），以及耐熱大腸菌群半乳糖苷酶（galactosidase）的顯色底物（SalmonGal/red）, 經(jīng)過44.5℃培養(yǎng)后，大腸埃希氏菌顯紫藍色，紅色或紫藍色菌斑都屬耐熱大腸菌群。
3 操作方法

3.1對于大腸菌群檢驗顯示陽性的紙片或產(chǎn)酸產(chǎn)氣的發(fā)酵管，用接種環(huán)挑取菌液，轉(zhuǎn)入2－3mL無菌水中混勻，用滅菌吸管吸取1mL慢慢均勻地滴加到大腸埃希氏菌耐熱大腸菌群測試片上，然后放下上層膜，靜置5 min使培養(yǎng)基凝固，zui后用手輕輕地壓一下。

3.2將接種好的紙片平放于培養(yǎng)箱中，44.5℃培養(yǎng)15～24h觀察結(jié)果。

4 結(jié)果判讀: 測試片上出現(xiàn)紅色或紫藍色菌斑都是耐熱大腸菌群陽性，其中紫藍色為大腸埃希氏菌陽性。沒有紅色或紫藍色斑點為陰性結(jié)果。

致病菌檢測試劑盒使用說明

1適用范圍：適用于生活飲用水、水源水及食品中致病性沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、副溶血弧菌、致瀉大腸埃希氏菌（含腸出血性大腸桿菌O157:H7）、臘樣芽孢桿菌、板奇腸桿菌檢測的檢測以及大腸菌群污染程度的檢測。

2方法原理：依據(jù)國標(biāo)GB/T4789.3.4.5.6.7.10.14-2003方法，采用包被技術(shù)將相對應(yīng)培養(yǎng)基包被在試劑盒底部，隨時取用。

3樣品稀釋：同國標(biāo)法。液體樣品取原液。固體或半固體樣品用滅菌生理鹽水配制成1:10和1:100的稀釋液。

4 致病菌檢測

4.1加樣：用滅菌吸管吸取原液或1:10樣品稀釋液4ml～10 ml（不得少于4ml）分別加入到標(biāo)號為1、2、3、A、B、C的增菌格（孔）內(nèi)。加樣后的1、2、3號分別為副溶血弧菌、致瀉大腸埃希菌、板奇腸桿菌增菌液；A、B、C分別為金黃色葡萄球菌、沙門菌、臘樣芽孢桿菌增菌液。

4.2培養(yǎng)：將加樣后的試劑盒蓋上蓋，平放在36℃±1℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)18小時。

4.3 觀察結(jié)果：如果某致病菌的增菌液發(fā)生渾濁，即預(yù)示含有此種致病菌?？砂磭鴺?biāo)法進一步檢測。也可取陽性菌液1mL，加入到含有9 mL滅菌生理鹽的試管內(nèi)，混勻，取1mL，接種到相對應(yīng)的測試片上，36℃±1℃培養(yǎng)18小時加以驗證。

5大腸菌檢測

5.1加樣：將試劑盒放在試驗臺面上，打開盒蓋，用滅菌吸管分別吸取3個原液或1:10樣品稀釋液1ml加到標(biāo)號為4、5、6的小培養(yǎng)基孔內(nèi)。另用滅菌吸管分別吸取3個1:10或1:100的樣品稀釋液1ml加到標(biāo)號為7、8、9的小培養(yǎng)基孔內(nèi)，標(biāo)號為10的小培養(yǎng)基孔內(nèi)可加入1ml滅菌生理鹽水作為培養(yǎng)基陰性對照孔使用。

5.2排氣泡：加樣后集氣窗內(nèi)如有氣泡存在，可將試劑盒以30～45度角傾斜使氣泡排出，必要時可輕輕用力在桌面上敲擊數(shù)下排出氣泡。

5.3培養(yǎng)：將加樣后的試劑盒蓋上蓋，平放在36℃±1℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)18～24小時。

5.4觀察結(jié)果：樣液變?yōu)辄S色為產(chǎn)酸、集氣窗中有氣泡為產(chǎn)氣，產(chǎn)酸產(chǎn)氣者為陽性結(jié)果，陽性結(jié)果的孔數(shù)越多，說明污染越嚴(yán)重。

6 注意事項

6.1致病菌檢測與大腸菌檢測可同時進行；加入樣品后不需搖勻；大腸菌檢測培養(yǎng)前一定要排氣泡，排氣泡的方法與結(jié)果觀察可參見www.bjzw.com中大腸菌試劑盒使用說明中的圖像顯示；在培養(yǎng)箱中取試劑盒時注意平托出來，避免由于試劑盒的傾斜使大腸菌陽性集氣窗中的氣泡流失而影響結(jié)果判斷。

6.2試劑盒為一次性無菌包裝用品，供一次性即開即用，。

7 保存條件和有效期：避光保存于陰涼干燥處，*溫度為2～8℃，有效期18個月。

 沙門氏菌測試片使用說明

1適用范圍及原理：適用于生活飲用水、水源水及食品等中沙門氏菌的檢測以及突發(fā)事件應(yīng)急需要。沙門氏菌屬腸道細(xì)菌科，包括那些引起食物中毒、導(dǎo)致腸胃炎、傷寒和副傷寒的細(xì)菌。能引起食物傳播性疾病，近年來，已經(jīng)成為zui常見的食物中毒原因。腸炎沙門氏菌感染通常源于奶制品、禽產(chǎn)品和肉產(chǎn)品；雞肉和雞蛋尤其是高風(fēng)險食品。沙門氏菌感染的癥狀通常是腸胃出現(xiàn)問題，包括惡心、腹部絞痛、嘔吐和腹瀉，一般zui多持續(xù)7天。在免疫力低下的人群中，如果不及時服用抗生素類藥品，沙門氏菌感染將導(dǎo)致生命危險。沙門氏菌測試片（Salmonella Count Plate BS205）含有選擇性培養(yǎng)基、沙門氏菌*辛酯酶的顯色指示劑和高分子吸水凝膠，運用微生物測試片專有技術(shù)，做成一次性快速檢驗產(chǎn)品，一步培養(yǎng)15-24h就可確認(rèn)是否帶有沙門氏菌。

2  操作方法

2.1 樣品處理：生活飲用水及其水源水取原液。其他樣品取 25g（mL）放入含有225 mL滅菌生理鹽水的取樣罐或均質(zhì)杯內(nèi)，制成1:10的樣品勻液。

2.2 接種：將沙門氏菌測試片（BS205）置于平坦實驗臺面，揭開上層膜，用無菌吸管吸取1mL樣品勻液慢慢均勻地滴加到紙片上，然后再將上層膜緩慢蓋下，靜置5 min使培養(yǎng)基凝固，zui后用手輕輕地壓一下，每個樣品接種兩片。

2.3 培養(yǎng)： 將測試片疊在一起放回原自封袋中，透明面朝上水平置于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)，堆疊片數(shù)不超過12片。培養(yǎng)溫度為36℃±1℃，培養(yǎng)15～24h。

3 結(jié)果判讀: 對測試片進行觀察，呈紫紅色的菌落為沙門氏菌；呈藍色的菌落為其他菌群。出現(xiàn)陽性菌落的樣本，用其他更為可靠的方法進行驗證，沒有條件的話至少再取樣重復(fù)檢驗一次。

4 附加說明

4.1有關(guān)驗證試驗表明，接純菌種（包括硫化氫陰性菌株）可以產(chǎn)生典型的紫紅色菌斑，其他腸桿菌呈藍色，葡萄球菌不生長。

4.2測試片具有較強的敏感性，在1.5×10^-8稀釋時仍可計算出菌落。臨床實際應(yīng)用結(jié)果顯示陽性檢出率高于分離培養(yǎng)法1.84‰，復(fù)查準(zhǔn)確率提高約13.0%（中國衛(wèi)生檢驗雜志2006,16（8）：954-955.）。

4.3注意使用過的測試片上帶有活菌，需及時按照生物安全廢棄物處理原則進行處理 。

金黃色葡萄球菌測試片使用說明

1適用范圍及原理：適用于生活飲用水、水源水及食品等中金黃色葡萄球菌的檢測以及突發(fā)事件應(yīng)急需要。金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus簡稱金葡菌）是人類zui常見的致病菌之一，其侵襲力很強，能產(chǎn)生多種致病物質(zhì)如：腸毒素、凝固酶等；可引起化膿性炎癥、毒素性疾病及葡萄球菌性腸炎。金葡菌所引起的中毒事件已成為世界性的公共衛(wèi)生問題，我國每年由金葡菌引起的食物中毒事件屢有報道。金黃色葡萄球菌測試片（Staph Count Plate BT206）含有選擇性培養(yǎng)基和專一性的酶顯色劑，運用微生物測試片專有技術(shù)，做成一次性快速檢驗產(chǎn)品，一步培養(yǎng)15-24h就可確定出病原菌的存在。

2  操作方法

2.1 樣品處理：：生活飲用水及其水源水取原液。其他樣品取 25g（mL）放入含有225 mL滅菌生理鹽水的取樣罐或均質(zhì)杯內(nèi)，制成1:10的樣品勻液。

2.2 接種：將金黃色葡萄球菌測試片（BT206）置于平坦實驗臺面，揭開上層膜，用無菌吸管吸取1mL樣品勻液慢慢均勻地滴加到紙片上，然后再將上層膜緩慢蓋下，靜置5 min使培養(yǎng)基凝固，zui后用手輕輕地壓一下，每個樣品接種兩片。

36℃±1℃，培養(yǎng)15～24h。

3 結(jié)果判讀: 紫紅色的菌落為金黃色葡萄球菌；呈藍色的菌落為其他大腸菌群。出現(xiàn)陽性菌落的樣本，用其他更為可靠的方法進行驗證，沒有條件的話至少再取樣重復(fù)檢驗一次。

4 附加說明

4.1有關(guān)驗證試驗表明，金黃色葡萄球菌測試片接純菌種可以產(chǎn)生典型的紫紅色菌斑，普通大腸桿菌呈藍色菌落，而沙門氏菌，變形桿菌在測試片上不生長。測試片的敏感度為1.2×10^-8。通過檢測211份糕點、熟肉、鮮肉和奶制品樣品，測試片法和國標(biāo)法的陽性率分別為10.43％和7.58％（中國衛(wèi)生檢驗雜志2007，17（8）：1456－1457.）。

4.2山東省疾病預(yù)防控制中心的驗證結(jié)果表明，當(dāng)金黃色葡萄球菌在0～9個菌落范圍內(nèi)時，測試片與血平板均能檢出，作為致病菌不得撿出的標(biāo)準(zhǔn)要求，可以作為金黃色葡萄球菌檢驗應(yīng)用。

4.3注意使用過的測試片上帶有活菌，需及時按照生物安全廢棄物處理原則進行處理 。

副溶血弧菌測試片使用說明

1適用范圍及原理：適用于生活飲用水、水源水及食品等中副溶血弧菌的檢測以及突發(fā)事件應(yīng)急需要。副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus）是一種廣泛分布于海洋與鹽湖中的嗜鹽性細(xì)菌，海產(chǎn)品中常有此菌，它是引起食源性疾病的主要病原之一，是夏、秋季沿海地區(qū)食物中毒和急性腹瀉的重要病原。據(jù)國家食源性疾病監(jiān)測網(wǎng)統(tǒng)計，我國近年由副溶血弧菌引起的食物中毒呈顯著上升趨勢，已成為我國一個嚴(yán)重的食源性公共衛(wèi)生問題之一。該菌引起的食物中毒臨床上表現(xiàn)為：上腹部疼痛、腹瀉、惡心、嘔吐、發(fā)熱等，腹瀉多為水樣便，亦有大便膿血，隨后腹部劇烈疼痛，持續(xù)1-2天。副溶血弧菌測試片（BH209）是一種商品化的一次性培養(yǎng)基產(chǎn)品，含有高選擇性培養(yǎng)基、吸水凝膠和特異酶指示劑等重要成分，培養(yǎng)15～24小時就可確認(rèn)是否有病原菌的存在。

2  操作方法

2.1 樣品處理：：生活飲用水及其水源水取原液。其他樣品取 25g（mL）放入含有225 mL滅菌生理鹽水的取樣罐或均質(zhì)杯內(nèi)，制成1:10的樣品勻液。

2.2 接種：將副溶血弧菌測試片（BH209）置于平坦實驗臺面，揭開上層膜，用無菌吸管吸取1mL樣品勻液慢慢均勻地滴加到紙片上，然后再將上層膜緩慢蓋下，靜置5 min使培養(yǎng)基凝固，zui后用手輕輕地壓一下，每個樣品接種兩片。

2.3 培養(yǎng)： 將測試片疊在一起放回原自封袋中，透明面朝上水平置于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)，堆疊片數(shù)不超過12片。培養(yǎng)溫度為36℃±1℃，培養(yǎng)15～24h。

3 結(jié)果判讀: 呈紫紅色的菌落為副溶血弧菌。多數(shù)非目的菌在測試片上不生長，少數(shù)能生長，如創(chuàng)傷弧菌和霍亂弧菌，但菌落呈藍色，明顯區(qū)別于目的菌。出現(xiàn)陽性菌落的樣本，用其他更為可靠的方法進行驗證，沒有條件的話至少再取樣重復(fù)檢驗一次。

4 附加說明

4.1 汕頭出入境檢驗檢疫局技術(shù)中心的對比試驗結(jié)果表明，副溶血弧菌測試片具有較高的檢測靈敏度和準(zhǔn)確性，對純菌的檢測靈敏度達到8cfu/mL，與SN標(biāo)準(zhǔn)方法符合率達到90%以上。

4.2 注意使用過的測試片上帶有活菌，需及時按照生物安全廢棄物處理原則進行處理 。